ISOLASI ENZIM

I.              TUJUAN

·           Mempelajari dan memahami cara memproduksi enzim amilase

·           Mengidentifikasi enzim yang dihasilkan

II.              ALAT DAN BAHAN

Alat

·           Gelas kimia

·           Gelas ukur

·           Erlenmeyer asa

·           Tabung reaksi + rak tabung reaksi

·           Pipet ukur

·           Pipet tetes

·           Jarum ose

·           spatula

·           Inkubator autoklaf

·           Sentrifuse

·           Ent case

·           Spectrofotometri

·           Neraca analitik + kertas timbang

·           Botol semprot

Bahan

·           KH₂PO₄

·           Larutan KI

·           Larutan Iod

·           Larutan HCL

·           Pati sagu

·           Bacto agar

·           Glukosa

·           Ekskrak ragi

III.              DASAR TEORI

I.              PROSEDUR KERJA

1.         Disiapkan alat dan bahan

2.         Dibuat media agar dengan menimbang  KH2PO4 0,1 gr, ekstrak ragi 1 gr, glukosa 0,5 gr, dan bacto agar 2 gr. Dilarutkan dalam 100 ml

3.         Dibuat media inokulum dengan menimbang KH₂PO₄ 0,1 gr, ekstrak ragi 1 gr dan tepung sagu 0,5 gr. Dilarutkan dalam 100 ml

4.         Dibuat media produksi enzim dengan menimbang KH2PO4 0,25 gr, ekstrak ragi 2,5 gr, dan pati sagu 1,5 gr. Disterilkan selama 15 menit dengan suhu 121⁰C. Media inokulum ini disimpan selama 72 jam.

5.         Dilakukan peremajaan mikroorganisme (endomycopsis)

6.         Dilakukan pemisahan enzim amilase

7.         Disaring dan dipisahkan cairan fermentasi enzim, cairannya diambil dan dibuang selnya. Cairan yang diambil disebut enzim kasar.

8.         Dilakukan uji secara kualitatif dengan menambahkan Iod pada cairan tersebut.

9.         Dibuat larutan pati dan ditambahkan iod dalam larutan pati.

10.     Dibuat kontrol dengan memipet 0,25 ml pati, ditambahkan KI

11.     Dilakukan uji kuantitatif untuk mengetahui aktivitas enzim amilase. Ditambahkan 0,25 ml enzim alpa-amilase; 0,25 pati larut.

12.     Diinkubasi selama 15 menit pada suhu 50 ⁰C, ditambahkan 0,25 ml;  0,25N

13.     Ditambahkan 0,25 ml HCL O,25 N; dan  0,25 ml KI.

14.     Diukur absorbansinya dengan panjang gelombang 600 nm

15.     Dihitung aktivitas enzim.

II.              DATA PENGAMATAN & PERHITUNGAN

Data Absorbansi

Pengujian	Waktu Inkubasi	Absorbansi
Sampel I	15 menit	0,104
Kontrol I	15 menit	0,250
Sampel II	30 menit	0,085
Kontrol II	30 menit	0,202
Sampel III	45 menit	0,118
Kontrol III	45 menit	0,246

Perhitungan

DP =   x faktor pengenceran x 10%

Keterangan :

DP                            =   jumlah enzim yang dapat menyebabkan penurunan intensitas kompleks sebanyak 10%

Faktor Pengenceran  = 100 ml/0,25 ml